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【干貨分享】第二期：顏色補(bǔ)償那些事兒

多重?zé)晒釶CR已經(jīng)廣泛地使用在各種病原體的檢測(cè)中，這得益于熒光PCR檢測(cè)儀多通道熒光采集的功能。

2022-01-20

多重?zé)晒釶CR已經(jīng)廣泛地使用在各種病原體的檢測(cè)中，這得益于熒光PCR檢測(cè)儀多通道熒光采集的功能。在使用羅氏480（LC1/LC2/Z cobas)進(jìn)行多重檢測(cè)時(shí)，往往會(huì)遇到需要做顏色補(bǔ)償?shù)那闆r，那么今天小編就與您聊一聊關(guān)于顏色補(bǔ)償?shù)哪切┦聝簙

為什么羅氏480需要做顏色補(bǔ)償？

首先，我們來(lái)看一下羅氏480的激發(fā)波長(zhǎng)及檢測(cè)波長(zhǎng)
LightCycler1的濾光片:

圖片.png

LightCycler2的濾光片:

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熒光通道發(fā)射光譜拋物線示意圖：

圖片.png

從上圖可以看出在一個(gè)多色反應(yīng)中，由于各染料的發(fā)射光的波長(zhǎng)有重疊，導(dǎo)致一個(gè)通道能夠捕獲到另一個(gè)通道所檢測(cè)的染料信號(hào)。這種熒光信號(hào)的溢出會(huì)導(dǎo)致無(wú)效的數(shù)據(jù)產(chǎn)生，即我們常說(shuō)的“串色”或“串孔”現(xiàn)象。

由于每臺(tái)儀器的濾光片是固定的，無(wú)法改變其激發(fā)光與檢測(cè)光波長(zhǎng)；想要校正這種溢出，在運(yùn)行這個(gè)實(shí)驗(yàn)或分析這個(gè)數(shù)據(jù)時(shí)，就需要應(yīng)用顏色補(bǔ)償目標(biāo)。當(dāng)用顏色補(bǔ)償目標(biāo)時(shí)，LightCycler 算法會(huì)使用補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)文件中的數(shù)據(jù)來(lái)補(bǔ)償熒光值的溢出，補(bǔ)償后即可以看到每個(gè)通道特定的信號(hào)。


什么時(shí)候要做顏色補(bǔ)償？
只有當(dāng)多個(gè)熒光通道（比如VIC和ROX同時(shí)使用）用于數(shù)據(jù)分析時(shí)才有必要采用顏色補(bǔ)償，當(dāng)使用單通道時(shí)無(wú)需采用顏色補(bǔ)償。
另外，由于合成的探針的熒光染料各個(gè)廠家之間存在一定的差異性，因此，不同廠家之間的顏色補(bǔ)償數(shù)據(jù)一般不通用。在更換檢測(cè)試劑盒時(shí)，需要進(jìn)行對(duì)應(yīng)廠家試劑的顏色補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)哦~

如何使用顏色補(bǔ)償？

首先，按顏色補(bǔ)償說(shuō)明書(shū)進(jìn)行顏色補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)
其次，進(jìn)行常規(guī)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
最后，在每次檢測(cè)完畢的分析界面調(diào)用補(bǔ)償數(shù)據(jù)，具體操作如下：
A. 點(diǎn)擊Color Comp 旁下拉菜單

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B. 選擇In Database

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C. 選擇補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

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D. 最后重新計(jì)算即可
E. 補(bǔ)償前后結(jié)果對(duì)比：

圖片.png

補(bǔ)償前

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補(bǔ)償后

從補(bǔ)償前后結(jié)果來(lái)看，即可確定VIC通道中的翹尾，是ROX通道串孔所致。羅氏480分析界面調(diào)用補(bǔ)償文件的方法也是一鍵操作，十分簡(jiǎn)便。針對(duì)一個(gè)廠家的試劑，顏色補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)只需做一次，數(shù)據(jù)便可一直使用。